支原體是細(xì)胞外生存的小微生物，是一類(lèi)缺乏細(xì)胞壁的原核細(xì)胞型微生物，呈高度多形性，有球形、桿形、絲狀、分枝狀等多種形態(tài)。它不同于細(xì)菌，也不同于病毒。從人體分離的16種支原體中，5種對(duì)人有致病性，即肺炎支原體、解脲支原體、人型支原體，生殖支原體及發(fā)酵支原體等。支原體只能黏附在呼吸道或泌尿生殖道的上皮細(xì)胞表面的受體上，而不進(jìn)入組織和血液。目前診斷支原體感染用的是培養(yǎng)法、血清學(xué)檢測(cè)法和基因診斷。

　　分離培養(yǎng)法

　　分離培養(yǎng)法是支原體檢測(cè)的金標(biāo)方法，其檢測(cè)準(zhǔn)確度高。這種方法是從可疑的細(xì)胞培養(yǎng)體系中取樣，并接種到適宜支原體生長(zhǎng)的瓊脂平板上。如果樣本中含有支原體，它們就會(huì)在這種瓊脂平板上*生長(zhǎng)，終形成明顯可見(jiàn)的特征性菌落。分離培養(yǎng)法基本不會(huì)出現(xiàn)假陰性結(jié)果，因此被譽(yù)為支原體檢測(cè)金標(biāo)準(zhǔn)。不過(guò)分離培養(yǎng)法也存在兩個(gè)弊端，一是檢測(cè)時(shí)間太長(zhǎng)，支原體要長(zhǎng)出明顯克隆至少需要4周時(shí)間。二是盡管可以檢測(cè)絕大多數(shù)支原體種類(lèi)，分離培養(yǎng)法也有力所不及的時(shí)候。

　　DNA檢測(cè)

　　DNA 檢測(cè)需要將可疑樣品與指示細(xì)胞共同培養(yǎng)，因此一般需要幾天時(shí)間。DNA檢測(cè)所用的指示細(xì)胞通常是細(xì)胞質(zhì)區(qū)域較大的Vero細(xì)胞，如果原樣本中含有支原體，那么當(dāng)細(xì)胞DNA被熒光染料(如Hoechst染料)染色時(shí)，就可以在指示細(xì)胞的核周?chē)^察到熒光斑點(diǎn)或熒光顆粒。分離培養(yǎng)法用來(lái)檢測(cè)支原體菌株并不可靠，而DNA法可以準(zhǔn)確的將其檢測(cè)出來(lái)。

　　PCR法

　　PCR 法也可以檢測(cè)菌株，PCR法檢測(cè)支原體只需幾個(gè)小時(shí)，是不靈敏的支原體檢測(cè)方法。該方法采用針對(duì)支原體DNA的引物用PCR檢測(cè)可疑樣本，其中PCR引物通常針對(duì)支原體的16S rRNA基因。在凝膠電泳過(guò)程中，支原體DNA會(huì)顯示為特異性條帶，以此指示支原體的存在。PCR法可以檢測(cè)大多數(shù)支原體，但謹(jǐn)慎起見(jiàn)可同時(shí)使用另一種檢測(cè)方法來(lái)進(jìn)行驗(yàn)證。

　　酶學(xué)檢測(cè)和ELISA

　　此外，也還存在一些其他支原體檢測(cè)方法。例如酶學(xué)檢測(cè)是將可疑樣本添加到特定底物中，在這一體系內(nèi)支原體的酶可以將ADP轉(zhuǎn)化為ATP，隨后能利用ATP發(fā)光的luciferase酶就可以指示支原體的存在。ELISA也能用于支原體檢測(cè)，以ELISA法為基礎(chǔ)的支原體檢測(cè)一般使用針對(duì)支原體16S rRNA基因的帶標(biāo)記探針或抗體，來(lái)檢測(cè)培養(yǎng)物中是否含有支原體。

　　定期檢測(cè)

　　支原體感染會(huì)使培養(yǎng)細(xì)胞慢慢枯萎，因此對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞定期進(jìn)行支原體檢測(cè)非常重要。一般來(lái)說(shuō)每1至3個(gè)月就應(yīng)該進(jìn)行一次支原體檢測(cè)。將定期支原體檢測(cè)常規(guī)化堅(jiān)持下去，是細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對(duì)支原體感染的關(guān)鍵。

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產(chǎn)品信息：

LONZA                 LT07-118                支原體檢測(cè)試劑盒

LONZA                 LT07-418                支原體檢測(cè)試劑盒

LONZA                 LT07-518                質(zhì)控對(duì)照品

LONZA                 LT07-710                支原體檢測(cè)試劑盒

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